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GBT 18204.4-2013 公共場所衛生檢驗方法第4部分：公共用品用具微生物

[2022-03-07 16:17:07]

GBT 18204.4-2013 公共場所衛生檢驗方法第4部分：公共用品用具微生物.pdf

1、范圍

GB/T 18204的本部分規定了公共場所公共用品用具細菌總數、真菌總數、大腸菌群、金黃色葡萄球菌和溶血性鏈球菌的采樣與測定方法。

本部分適用于公共場所內公共用品用具細菌總數、真菌總數、大腸菌群、金黃葡萄球菌以及溶血性鏈球菌的測定,其他場所可參照執行。

2、術語和定義

下列術語和定義適用于本文件。

2.1

細菌總數total bacterial count

公共用品用具經過采樣處理,在營養瓊脂培養基上經35℃～37 ℃,48 h培養所生長發育的嗜中溫性需氧和兼性厭氧菌落的總數。

2.2

大腸菌群coliforms

在37 ℃,24 h培養能發酵乳糖、產酸、產氣.需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌2.3

金黃色葡萄球菌staphylococcus aureus

在Baird Parker培養基或血平板培養基上生長良好,分解甘露醇產酸,血漿凝固酶陽性的革蘭氏陽性葡萄狀球菌。

2.4

真菌總數total fungi count

在孟加拉紅或沙氏瓊脂培養基上經25笆?28 °C、3 d?7 d培養所形成菌落的總數。

2.5

溶血性鏈球菌 streptococcus hemolyticus

屬于鏈球菌屬，為革蘭氏陽性菌，分解葡萄糖，產酸不產氣，血平板上產生溶血圈。

在孟加拉紅或沙氏瓊脂培養基上經25 ℃~28 ℃、3 d~7 d培養所形成菌落的總數。

3、細菌總數平皿計數法

3.1培養基與試劑

3.1.1 生理鹽水成分:

氯化鈉 8.5 g

蒸餾水 1 000 mL

制法:稱取8.5 g氯化鈉溶于1000 mL蒸餾水中,分裝到試管內,每管10 mL,121℃高壓滅菌15 min。

3.1.2營養瓊脂成分：

蛋白臉

牛肉膏

氯化鈉

瓊脂

蒸餡水

制法:將上述成分混合后，加熱溶解，調整pH為7. 4?7.6,分裝于玻璃容器內，經103.43 kPa （121 °C ,15 lb）滅菌20 min,儲存于冷暗處備用。

3.2儀器和設備

高壓蒸汽滅菌器°

樣品的稀釋:將放有采樣后棉拭子的試管充分振搖,此液為1 ： 10的樣品勻液。用1 mL無菌吸管或微量移液器吸取1 ： 10樣品勻液1 mL,沿管壁緩慢注于盛有9 mL生理鹽水稀釋液（3.1.1）的無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1支無菌吸管反復吹打使其混合均勻，制成1 : 100的樣品勻液。按同法制備10倍系列稀釋祥品勻液，每遞增稀釋1次，換用1次1 mL無菌吸管或吸頭。

3.3.3樣品的接種:根據對樣品污染狀況的估計，選擇1個?2個適宜稀釋度的樣品勻液,在進行10倍遞增稀釋時,每個稀釋度分別吸取1 mL樣品勻液于2個無菌平皿內。同時分別取1 mL稀釋液加入兩個無菌平皿作空白對照。

334樣品的培養：及時將15 mL?20 mL冷卻至45 °C?50 °C的平板計數瓊脂培養基（可放置于 46 °C±1 °C恒溫水浴箱中保溫）傾注平皿，并轉動平皿使其混合均勻。瓊脂凝固后，將平板翻轉， 36 °C±1 °C培養 48 h±2 h。

干熱滅菌箱。

恒溫培養箱：36笆士1 °C。

冰箱。

電爐或微波爐。

天平:感量0.1 go 渦旋混合器。

無菌試管、平皿（直徑9 cm）、刻度吸管等& 滅菌棉拭子。

滅菌剪刀。

pH計或精密pH試紙。

放大鏡或（和）菌落計數器。

3.3檢驗步驟

3.4菌落計數 3.4.1可用肉眼觀察，必要時用放大鏡或菌落計數器，記錄稀釋倍數和相應的菌落數量（CFU）。

3.4.2選取菌落數在30 CFU?300 CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計數菌落總數。低于30 CFU 的平板記錄具體菌落數，大于30。CFU的可記錄為多不可計。每個稀釋度的菌落數應采用兩個平板的平均數。

3-4.3其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜釆用，而應以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋

2度的菌落數;若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計算半個平板后乘以

2,代表一個平板菌落數。

3.4.4平板內如有鏈狀菌落生長時（菌落之間無明顯界限），應將每條鏈（不同來源）作為一個菌落計。

3.5不同稀釋度菌落計數計算規則

3.5.1若只有一個稀釋度平板上的菌落數在適宜計數范圍內，計算兩個平板菌落數的平均值,再將均值乘以相應稀釋倍數，作為每毫升中菌落總數結果。

3.5.2若有兩個連續稀釋度的平板菌落數在適宜計數范圍內時，則總菌落數按式（1）計算，示例見表 2 SC

4大腸菌群多管發酵法

4.1培養基和試劑 4.1.1乳糖膽鹽發酵培養液

成分：

蛋白臃

豬膽鹽（或牛、羊膽鹽）

乳糖

漠甲酚紫水溶液（質量濃度= 0.04%）

蒸館水

制法:將蛋白臉、膽鹽及乳糖溶于蒸儲水中，調pH至7.4,加漠甲酚紫溶液，混勻，分裝到帶有倒管的試管中，每管10 mLo經68.96 kPa（115 °C ,10 lb）高壓滅菌20 mino

注：雙料乳糖膽鹽發酵管除蒸儲水外，其他成分加倍。

4.1.2伊紅美藍瓊脂

成分：

蛋白臃

乳糖

磷酸氫二鉀

瓊脂

伊紅水溶液（質量濃度=2 % ）

美藍水溶液（質量濃度= 0.5%）

蒸儲水

制法:將蛋白臉、磷酸鹽和瓊脂溶解于蒸館水中，調整pH至7.2,分裝到燒瓶內。經68.96 kPa （115 °C ,10 lb）高壓滅菌20 min,臨用時加入乳糖并加熱熔化瓊脂，冷至50 °C~55 加入伊紅和美藍溶液，搖勻，傾注平皿。

4.1.3乳糖發酵管

成分：

蛋白腺 20

乳糖 10

漠甲酚紫水溶液（質量濃度-0.04%） 25

蒸館水

制法:將蛋白腺及乳糖溶于水中，調pH至7.4,加入指示劑，分裝到帶有倒管的試管中，每管3 mL, 經 68.96 kPa（115 °C,10 lb）高壓滅菌 20 mino 4.1.4革蘭氏染色液 4.141結晶紫染色液

成分：

結晶紫

乙醇（95%,體積分數）

5金黃色葡萄球菌平皿鑒定法

5.1培養基和試劑

5.1.1胰酪陳大豆肉湯

成分：

胰酪豚（或胰蛋白蹤）

植物蛋白豚（或大豆蛋白蹤）

氯化鈉

磷酸氫二鉀

葡萄糖

蒸饞水

制法:將上述成分混合后，加熱溶解，調pH為7.2?7.3,分裝，121 °C、20 min高壓滅菌。

結果報告

凡在上述選擇平板上有可疑菌落生長，經染色鏡檢，證明為革蘭氏陽性葡萄球菌，血漿凝固酶試驗陽性，可報告檢出金黃色葡萄球菌。

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